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本发明提供了一种嚏根草配基空间异构体化合物及其制备和应用，通过大孔树脂和二维制备色谱分离技术从传统中药蟾皮中制备嚏根草配基空间异构体化合物，其主要制备步骤为将蟾皮剪碎，乙醇提取，总提物经大孔树脂分离得蟾蜍二烯内酯提取物，再经过二维制备色谱分离纯化得到该化合物。经体外实验证明其具有较好的抑制肿瘤细胞的作用。